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CCK-8试剂盒

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BKM-CK-5ml
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2-8

使用说明:

细胞数量确定

Ø将细胞悬浮液(100μL/孔)接种在96洞孔板中。将板在潮湿的培养箱中预孵育(例如,在37℃,5%CO2下)。

Ø向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡,因为它们会干扰O.D.读数。

Ø将培养板在培养箱中孵育1-4小时然后使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

细胞增殖和细胞毒性测定

Ø将种子细胞以103-104个细胞/孔的密度在96孔板中在100μL培养基中培养,含有或不含有待测化合物。将细胞在CO2培养箱中于37℃培养24小时。

Ø10μL不同浓度的待测物质加入板中。

Ø将培养板在培养箱中孵育适当的时间(例如,6,12,24或48小时)。

Ø使用重复移液器向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡,因为它们会干扰O.D.读数。

Ø将培养板在培养箱中孵育1-4小时。

Ø在读取印版之前,重要的是在轨道振动器上轻轻混合1分钟,以确保颜色均匀分布。

Ø使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

数据分析

统计分析有几种方法,您可以选择使用O.D.值或细胞数量,我们提供其中一种方法。

细胞存活率(%)= [(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100

抑制率(%)= [(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100

As =实验孔吸光度(含有细胞,培养基,CCK-8和待测化合物的孔的吸光度)。

Ab =空白孔吸光度(含有培养基和CCK-8的孔的吸光度)。

Ac =对照孔吸光度(含有细胞,培养基和CCK-8的孔的吸光度)。

制作标准曲线

Ø 细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数。

Ø 使用培养基,等比稀释细胞悬液为一个浓度梯度,通常需要5-7个浓度梯度,每组几个复孔。然后接种细胞。(注意每孔的细胞数量。如果您将细胞悬液稀释在管中,在加入培养板的孔之前,请小心再次混匀细胞。每孔中细胞悬液的体积应该是一致的。)

Ø 培养直至细胞贴壁(通常2-4小时),然后每100 μl培养基加入10 μl CCK-8。继续孵育1-4小时,用酶标仪测量450nm处的吸光度。制作出一条以细胞数为X轴坐标,O.D.值为Y轴坐标的标准曲线。

可以基于该曲线确定待测样品的细胞数。使用此标准曲线的先决条件是培养检测条件相同。

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