考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。
使用说明参考：
微孔酶标仪法
1. 完全溶解蛋白标准品，取 10μL，稀释至 250μL，使终浓度为 0.2mg/mL。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀释标准品。
2. 5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 1mL 5×G250 染色液，加入 4mL 双蒸水，混匀成 1×G250 染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。
3. 将标准品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分别加到 96 孔板中，加 PBS 稀释液补足到 20 微升。
4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释），加 20 微升到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
5. 各孔加入 200 微升稀释后的 1×G250 染色液，室温放置 3-5 分钟。
6. 用酶标仪测定 A595，或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。
7．根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
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